ХОД РАБОТЫ / ТЕХНОЛОГИЯ (описание эксперимента):

* Помещение, где проводится определение группы крови, должно быть светлым, с температурой от 15 до 25 °С.

  1. На плоскость (планшет) наносят пипеткой, индивидуальной для каждой ампулы, по 2 кап. (0,1 мл) стандартной сыворотки двух различных серий каждой группы слева направо: Оαβ(Ⅰ), Аβ(Ⅱ), Вα(Ⅲ). Итого 6 капель на расстоянии 3-4 см друг от друга, которые образуют два ряда.

  2. Рядом со стандартными сыворотками наносят по 1 кап. исследуемой крови величиной с булавочную головку - 0,01 мл взвеси исследуемых эритроцитов (кровь для исследования берут обычным способом).

  3. Встряхиванием (или первой стеклянной палочкой) перемешивают сыворотку с кровью группы O(Ⅰ), второй стеклянной палочкой перемешивают каплю крови с сывороткой A(Ⅱ), периодически покачивают и смотрят результат через 5 минут.

  4. Реакция агглютинации наступает через 1-5 минут. Наблюдают за ходом реакции не менее 5 мин. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 с, однако наблюдение следует вести и далее – до 5 мин ввиду возможности более позднего возникновения агглютинации. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.

  5. В те капли, где наступила агглютинация, вносят по 1 капле (около 0,05 мл) физиологического раствора натрия хлорида (NaCl) и продолжают наблюдение при периодическом покачивании планшета до истечения 5 мин.

  6. Реакция гемагглютинации в каждой капле может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течении первых 10-30 сек начала перемешивания в смеси появляются видимые невооруженным глазом мелкие красные «зернышки» (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие агглютинаты постепенно сливаются в более крупные, а иногда в хлопья неправильной формы, при этом сыворотка совсем или почти совсем обесцвечивается. При отрицательной реакции жидкость все время (5 мин) остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается агглютинатов.

    Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы, но разных серий должны совпадать.

  7. Аг (эритроциты крови) + АТ (стандартная сыворотка) + электролит = гемагглютинат.

    Оценка результатов изогемагглютинации:

    1. Изогемагглютинация.При положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов. Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние в хлопья. Сыворотка почти обесцвечивается;

    2. при отрицательной реакции смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;

    3. при работе с 3-я сыворотками групп О(Ⅰ), А(Ⅱ), В(Ⅲ) возможны 4 комбинации реакций:

      1. если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(Ⅰ) группа крови;

      2. если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(Ⅱ), а сыворотки О(Ⅰ) и В(Ⅲ) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(Ⅱ) группа крови;

      3. сыворотка группы В(Ⅲ) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(Ⅰ) и А(Ⅱ) дали положительную - это В(Ⅲ) группа крови.

      4. все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(Ⅳ) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(Ⅳ) группы. Для этого на плоскость наносят большую (0,1 мл) каплю сыворотки АВ0 (Ⅳ) и к ней добавляют маленькую (0,01 мл) каплю исследуемой крови и смотрят результат через 5 минут. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии ее в каплях со стандартными сыворотками групп Оαβ(Ⅰ), Аβ(Ⅱ) и Вα(Ⅲ) позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0(Ⅳ).

Далее

Copyright © 2012